Templatgesteuerte Festphasensynthese

In der vorliegenden Arbeit wurde eine Festphasensynthese auf einem DNA-Templat etabliert, welche die schrittweise Verlängerung eines 3'-aminoterminalen Oligonukleotids erlaubt. Diese sogenannte templatgesteuerte Festphasensynthese kombiniert Aspekte der chemischen Primerverlängerung mit Aspekten der Festphasensynthese von Oligonukleotiden bzw. Peptiden. Als Monomere für die Verlängerungsreaktionen dienten die 7-Azabenzotriazol-Aktivester der 3' Amino-2',3'-didesoxynukleosid-5'-monophosphate mit einer Azidomethyloxycarbonyl-(Azoc) geschützten 3'-Amino¬funktion. Mit den Azoc-geschützten Monomeren und der in der vorliegenden Arbeit erstmals beschriebenen Festphase wurden templatgesteuerte Festphasensynthesen auf gemischten DNA-Templatsequenzen durchgeführt. Dabei wurden nach jedem templatgesteuerten Verlängerungsschritt überschüssige Monomere durch magnetische Separation von der Festphase und somit den Oligonukleotiden abgetrennt. Vor dem nächsten Verlängerungsschritt wurde die Azoc-Schutzgruppe über eine Staudinger-Reduktion mit dem wasserlöslichen Tris(2-carboxyethyl)phosphan (TCEP) unter nicht denaturierenden Bedingungen abgespalten. Bei Zugabe des jeweils richtigen Monomers konnten zehn aufeinanderfolgende Verlängerungsreaktionen und bei Zugabe einer Mischung der vier Monomere konnten acht aufeinanderfolgende Verlängerungs¬reaktionen erreicht werden, wobei jeweils das korrekte Verlängerungsprodukt als Hauptprodukt nachgewiesen werden konnte.